Studopediya

КАТЕГОРИЯ:


Астрономия- (809) Биология- (7483) Биотехнологии- (1457) Военное дело- (14632) Высокие технологии- (1363) География- (913) Геология- (1438) Государство- (451) Демография- (1065) Дом- (47672) Журналистика и СМИ- (912) Изобретательство- (14524) Иностранные языки- (4268) Информатика- (17799) Искусство- (1338) История- (13644) Компьютеры- (11121) Косметика- (55) Кулинария- (373) Культура- (8427) Лингвистика- (374) Литература- (1642) Маркетинг- (23702) Математика- (16968) Машиностроение- (1700) Медицина- (12668) Менеджмент- (24684) Механика- (15423) Науковедение- (506) Образование- (11852) Охрана труда- (3308) Педагогика- (5571) Полиграфия- (1312) Политика- (7869) Право- (5454) Приборостроение- (1369) Программирование- (2801) Производство- (97182) Промышленность- (8706) Психология- (18388) Религия- (3217) Связь- (10668) Сельское хозяйство- (299) Социология- (6455) Спорт- (42831) Строительство- (4793) Торговля- (5050) Транспорт- (2929) Туризм- (1568) Физика- (3942) Философия- (17015) Финансы- (26596) Химия- (22929) Экология- (12095) Экономика- (9961) Электроника- (8441) Электротехника- (4623) Энергетика- (12629) Юриспруденция- (1492) Ядерная техника- (1748) Arhitektura- (3434) Astronomiya- (809) Biologiya- (7483) Biotehnologii- (1457) Военни бизнесмен (14632) Висока technologies- (1363) Geografiya- (913) Geologiya- (1438) на държавата (451) Demografiya- ( 1065) Къща- (47672) журналистика и смирен (912) Izobretatelstvo- (14524) външен >(4268) Informatika- (17799) Iskusstvo- (1338) историята е (13644) Компютри- (11,121) Kosmetika- (55) Kulinariya- (373) културата е (8427) Lingvistika- (374) Literatura- (1642) маркетинг-(23702) математиците на (16968) Механична инженерно (1700) медицина-(12668) Management- (24684) Mehanika- (15423) Naukovedenie- (506) образователна (11852) truda- сигурност (3308) Pedagogika- (5571) Poligrafiya- (1312) Politika- (7869) Лево- (5454) Priborostroenie- (1369) Programmirovanie- (2801) производствено (97 182 ) индустрия- (8706) Psihologiya- (18388) Religiya- (3217) Svyaz (10668) Agriculture- (299) Sotsiologiya- (6455) на (42831) спортист строително (4793) Torgovlya- (5050) транспорт ( 2929) Turizm- (1568) физик (3942) Filosofiya- (17015) Finansy- (26596) химия (22929) Ekologiya- (12095) Ekonomika- (9961) Electronics- (8441) Elektrotehnika- (4623) Мощност инженерно ( 12629) Yurisprudentsiya- (1492) ядрена technics- (1748)

Микробиологичната чистота на крайни фармацевтични продукти

Таблица 27.

категория Препарати Препоръчано
Медикаменти, които са изисквания на "стерилност" Съставите ще бъдат стерилни
• За локално приложение, локално, но интравагинално, • За орално приложение в ухото, носа • За прилагане към респираторния тракт • трансдермални пластири Освен лекарства, които трябва да бъдат стерилни • Общ брой аеробни бактерии и гъбички общо - не повече от 10 2 в 1 грам или 1 мл или 1 лепило (включително лепило страна и база) • Липсата на ентеробактериите и някои други Грам-отрицателни бактерии върху един пластир (включително лепило страна и база) • не повече от 10 1 ентеробактерии и някои други грам-отрицателни бактерии в един грам или 1 мл за други лекарства • отсъствие Pseudomonas Aeruginosa в 1 грам или 1 мл, или 1 лепило (включително лепило страна и база) отсъствие стафилококус ауреус 1 грам или 1 мл, или 1 лепило (включително лепило страна и база)



В следващите раздели на тази глава ще разгледа морфологични и биохимични характеристики на микроорганизми (в посочения ред в определящ фактор Bürgi бактерии), съдържанието на които се регулират от фармацевтичната индустрия за производство, поради съществуващите методи за изолиране и идентификация, както и тяхното значение в човешката патология.

Грам-отрицателни аеробни (микроаерофилна бацил)

Родът Pseudomonas. Прави или леко извити, но не и спираловидни пръти от 0.5-1.0 х 1.5-5.0 микрона. Mobile (полярен камшичета). Аеробни. Възможност за анаеробно дишане с помощта на нитрати като електронен акцептор. Някои видове - по избор avtotro Осцилоскопи. Родът включва повече от 70 вида. Те са широко разпространени в природата. Някои видове са патогенни за хората, животните и растенията могат да замърсят фармацевтични препарати размножават в антисептични разтвори. Въз основа на ДНК хомоложност на някои видове принадлежи към рода Pseudomonas, са разпределени на рода на Burkholderia (B. mallei, B.pseudomallei, B.cepacia), роден Brevundimonas (B.diminuta), и др.)

Pseudomonas Aeruginosa - основен причинител на хронични възпалителни процеси, особено в болници. Това е общи и местни гнойни процеси: отит, pielity, цистит, кератит, менингоенцефалит, заразява повърхността на рани и изгаряния. Тя е устойчива на антибиотици. Ние описваме избухването на отравяне поради консумация на храни (месо, риба), замърсени-ция този микроорганизъм. Той образува биофилм от оборудването на водоснабдителната система. Способността да унищожи много от химикалите, включително биоциди.



Тя расте на прости хранителни среди в широк диапазон от температури (4-42 ° C), оптимална температура 37 ° C. Стриктно аероб. В течна среда (пептонна вода, IIB) образува характерна сивкаво-сребърно фолио, застаряването на мътността на културата се случва. В гъсти медии (MPA, кръвен агар, Ендо агар, Левин Ploskirova) Вид колонии зависи от състава на средата. На специални медийни форми в синьо-зелено пигменти (pyocyanin, флуоресцеин, и др.), Се открояват в хранителна среда. Има също така не-пигментирани щамове. Формира токсини и други фактори на вирулентност.

Pseudomonas (Burkholderia) Cepacia - повсеместна бактерия, често се замърсява решения за местна упойка, лекарства, козметика. Епидемиология и етологията има много общо с тези на П. aeruqinosa. Mobile полиморфна Bacillus, Грам оцветени биполярно. оптимална температура от 30 ° С Изолиране изисква специален селективен медии. На кръв Огрето полимиксин форми мътна мазни белезникави-сив колонии. Образуването на жълто или зеленикаво-neflyu orestsiruyuschego феназин пигмент, разтворим в хлороформ.

семейство Enterobacteriaceae

Семейството Enterobacteriaceae включва над 115 вида, принадлежащи към 30 рода:. Това прави пръти 0.3-1.8 микрона. Mobile (Перито rihi) или фиксиран. Присъства навсякъде: в почвата, водата, по растенията при животните. Някои от тези патогени причиняват заболяване и стомашно-чревни, дихателни и инфекции на пикочните пътища, менингит и инфекции на рани. Около 50% vnutribolnichngh инфекции, причинени от видове от това семейство. Най-често Escherichia Coli, Serratia marcescens и Klebsiella видове от родовете, Enterobacter, Proteus, Providencia, Shigella.

Pod Escherichia. Прави пръти 1,1-1,5 г 2.0-6.0 мм, единично или по двойки. За много типични щамове капсули или микрокапсули.

Видове от рода Escherichia и мобилността различават по биохимична активност.

Ешерихия коли и колибактерии бактерии

Е. коли - постоянни жители и важен представител на нормалната чревна микрофлора на хора и топлокръвни животни. Повечето щамове E.coli не се считат за инфлуенца, но гледката включва опортюнистични и патогенни щамове. Последно се различават по вирулентни фактори, те притежават (ентеротоксигенните, ентеропатогенните, enterogemorraticheskie и др.)

През 1892 Shardinger препоръчва използването на Е. коли, както санитарно-показателни микроорганизми.

В фенотипните характеристики на E.coli, има много общо с другите видове семена. Enterobacteriaceae (Klebsiella, Citrobacter и Enterobacter), беше предложено, че група от бактерии, наречен колиформи. Този термин не е таксономична но служи като работна дефиниция групи факултативно анаеробни пръчковидни бактерии грам-отрицателни, които ферментират лактозата до образуване на киселина и газ на 48 часа инкубация при 35 ° C.

Някои колиформи са в състояние да живеят в среда, така че една група от санитарно-показателни колиформи бяха помолени да се обадите на фекални колиформи. Фекални колиформи се считат за представители на общи колиформи, които растат и ферментиращи лактозата при повишена температура на инкубация (термоустойчивата колиформи). Тази група се състои главно от Е.коли; видове Klebsiella, но също така може да ферментира лактоза при температура 44-45 ° С За диференциация на E.coli и Klebsiella SPP. са специални методи.

Показател общо колиформи се използват като индикатор за санитарното състояние на вода или като основен показател за санитарни условия на производство в хранително-вкусовата и фармацевтичната; измери термоустойчивата колиформи - да се опише здравния статус на вода; E.coli - свеж индикатор на фекално замърсяване.

Родът Citrobacter. Прав пръчка 1 х 2-6 ​​мм, единични или по двойки, обикновено се движат в. Факултативни анаероби. Се намират в почвата, водата и храната са част от нормалната чревна микрофлора. Щамовете на някои серогрупи причинят гастроентерит и хранителни заболявания, опортюнистични и вътреболнични инфекции.

Родът Enterobacter. Директни пръчки 0.6-1 х 1.2-3.0 микрона. Преместването. оптимален температурен диапазон от 30-37 ° С Причини за възникване на вътрешно-болнични инфекции и oportunisticheskie.

Родът Klebsiella. Прави пръти 0,3-1,0 х 0,6-6,0 мм, единичен, по двойки или къси вериги. Фиксирана. За К. пневмония и К. oxytoca се характеризира с масивна капсула полизахарид, който определя образуването на големи слузести колонии. Има повече от 80 капсулни антигени, използвани за определяне на серотипа на Klebsiella. Широкото, открити в почвата, водата, на плодове и зеленчуци.

Температурни граници на растежа на 12-43 ° С, оптималната рН на 7.2.

Причина опортюнистични и вътреболнични инфекции.

К. пневмония образува екзотоксин. Това е причинителят на бронхо-белодробни заболявания, понякога - менингит; при деца може да предизвика септицемия, цистит и други заболявания.

К. ozaenae - причинител на хронични заболявания на дихателните пътища.

К. rhinoscleromatis причинява хронична грануломатозна или по-rofichesky процеси в лигавицата на горните дихателни пътища.

Родът Morganella. Прави пръти 0.6-0.7 х 1.0-1.7 микрона. Mobile (peritrih). Роенето отсъства. Е изолиран от изпражненията на бозайници. Причина опортюнистични инфекции.

Родът Proteus. Прави пръти 0,4-0,8 х 1-3 микрона. Mobile (peritrih). Повечето щамове се извършва пълно с периодични цикли на миграцията, което води до образуване на концентрични зони или разпределение под формата на единен филм на повърхността на мокра среда. Намерени в гръбначно черво, в почвата, сметища, замърсени води. Причиняват инфекции на пикочните пътища, вторични лезии, често за изгаряния.

Родът Providencia. Прави пръти 0.6-0.8 х 1,5-2,5 микрона, мобилен (peritrih), роенето отсъства. Причина стомашно-чревни нарушения, инфекции на пикочните пътища, вторични лезии в рани и изгаряния

Родът Salmonella. Прави пръти 0.7-1.5 х 2-5 микрона. Mobile (peritrih). Намерени в хора и животни, храни и околната среда. Причина коремен тиф, чревни инфекции, говорете sikoinfektsii, септицемия. Те образуват ендотоксин.

оптимална температура от 35-37 ° С Диапазонът на рН 4,1-9,0. Optimum 7.2-7.4. Инхибиране на растежа на ограничаване или високи концентрации на сол и захар.

Биохимични свойства може да варира дори в рамките на същия серотипа.

Родът Serratia. Прави пръти 0,5-0,8 х 0,9-2 микрона. Обикновено, мобилен (peritrih). Някои видове образуват розово-червено водонагряв-разтворим пигмент prodignozin. Разпределени в цялата (вода, почва, растения). S.marcescens -septitsemiyu причинява опортюнистични инфекции, инфекции на пикочните пътища, мастит при крави.

Родът Shigella. Директни пръчки неподвижно. Морфологичните характеристики не се различават от останалите членове на семейството. Enterobacteriaceae. Причина дизентерия и други шигелоза - предавани болести от храна и вода, често срещани сред примати, включително хора. В биохимични характеристики Shigella трудно да се разграничат от Е.коли. Въз основа на ДНК хомоложност може да се дължи на същите видове. S. dysenteriae произвежда екзотоксин с ясно изразен тропизъм за нервната система и чревната лигавица. Други видове Shigella образуват ендотоксини. Причина дизентерия.

Родът Yersinia. Прави пръти 0,5-0,8 х 1-3 мм, понякога придобиват сферична форма. Mobile (peritrih) или фиксирани (Y. Pestis). Мобилност и обмяната на веществата зависи от температурата. Температурни граници на растежа - 0-39 ° С, за Y.pestis - до 45 ° С; Оптимален растеж на 28-30 ° С; оптимална рН 6,9-7,2. Той е широко разпространен в природата, животните и човешките паразити yersiniozy - опасни инфекциозни заболявания.

грам-положителни коки

В повечето организми, тази група сферични клетки, понякога овални, винаги ясно Грам-положителни, неподвижна.

Родът Enterococcus. Enterococcus Родът е представен от видове по-рано, отнасящи се към род Streptococcus (Сф aecalis, С. faecium, S. птичи, S. Gallinarum, и др.)

Сферични или овални клетки 0.6-2.0 х 0.6-2.5 хм или по двойки (в течна среда) къси вериги. Факултативни анаероби. Ферментиращи въглехидрати, за да образуват различни лактат. Те имат нужда от комплексна хранителна среда. Каталаза. Отглеждане температура в 10-45 ° С, оптимална температура 37 ° С Отглеждане при рН 9.6, концентрацията на NaCl 6,5%, жлъчка - 40%. Като правило, принадлежат на серологично група Lancefield D. Тя е широко разпространен в природата, живеят в червата на гръбначните животни, понякога причиняват гнойни инфекции.

Всички видове опции и ентерококи са признати санитарни и индексни правителствена организми и да отговаря на изискванията, наложени им. Това е постоянните жителите на червата, въпреки че техният брой е по-малък от E.coli; те не са в състояние да се размножават в околната среда (повече може да се размножават в органично съдържание 375 г / л и температура от 20 ° C и по-горе). Да не се показват по-изразена променливост в околната среда, което улеснява тяхната идентификация и нямат аналози в околната среда. Смърт на разстояние в среда, много по-рано, отколкото на E.coli, затова винаги предполагат свеж фекално замърсяване. Най-важното предимство е тяхната устойчивост на неблагоприятни външни влияния. Те са устойчиви на топлина до 65 ° С в продължение на 30 минути, което им качество режим Индикатор за пастьоризация прави. Ентерококи са устойчиви на високи концентрации на NaCl (6,5-17%), позволявайки ви да ги използват в анализа на морска вода. Enterococci устойчив в интервала рН 3-12, че може да се използва в анализа на отпадъци кисела и алкална характер.

В момента, количествен enterokokkometriya приемане на международни стандарти за вода като допълнителен индикатор на фекално замърсяване, и откриване на атипична E.coli - основен метод за откриване на фекално замърсяване.

Трудностите са като ентерококи дисплей среда трябва да се използва сложен състав и че за откриването им изисква повече време, отколкото колиформи.

Родът Staphylococcus. Повсеместният микроорганизми, чувствителни към топлина и биоциден действие. Ето защо, тяхното присъствие в стаята показва лошо хигиенно състояние.

Стафилококи форма клетки с диаметър 0,5-1,5 микрона, които са разположени в тампоните поотделно, по двойки или в групи. Факултативно анаеробни, каталаза, oksidazootritsatelny, чувствителни към lysostaphin, лизозим, но не растат в среда, съдържаща 5-10% NaCl. В гъсти медии образува мътна, кръгли колонии от жълто, кремаво или портокал. В течна среда причина мътност и в насипно състояние седименти. Втечни желатин, за да образуват H 2 S. намали нитратите до нитрити.

Стафилококус ауреус причинява различни гнойни-септична инфекции и хранително отравяне. S.aureus коагулира плазма, което е критерий за определяне на вида.

Дрожди и плесени

Гъби - голяма група от еукариотните организми, които се различават по своята морфология и физиология. По принцип saprot-rofy, някои видове причиняват човешки и животински заболявания (микози). Уреждане на различни продукти - храна и лекарствени суровини, храни, фуражи, фармацевтични продукти, те ги доведе до увреждане и може да доведе до опасни микотоксини в околната среда. Свържи се с материала, заразени с гъбички може да доведе до развитие на заболявания, включително алергични. Повече материал е представен в глава 2.

16.3. Принципи на микробиологичен контрол DL

Наблюдение се извършва на всички централи, които произвеждат лекарства, за да се оцени качеството на крайния продукт от гледна точка на "микробиологична чистота" и неговото съответствие с изискванията. Изследване, проведено в микробиологичните лаборатории, акредитирани в съответствие с OST 42-503-95.

Схема за анализ трябва да отговарят на следните изисквания:

■ лимит за краткостта на времето и броя на тестовете, използвани;

■ използването на методи, които дават количествено точност

броене и надеждна идентификация на микроорганизми, регламентирани.

Микробиологичните лекарства за контрол на контрол се различава от традиционните храни, или медицински материали. Разликата се използва в анализа на обогатяване медийни лекарства на евентуалното наличие на опортюнистични патогени, които могат да присъстват в състава в малки количества.

В този случай, директна сеитба върху твърда замърсена диагностична среда подготовка на диференциала, както се прави в санитарно микробиология при анализа на продукти в повечето случаи не доведе до откриване на бактерии от желаните групи с изключение на високо замърсяване.

В богата среда (селективна) има условия за преференциално растежа и размножаването на някои опортюнистични патогени, понякога за сметка на добавяне на повече инхибитори на растежа на бактериите. При благоприятни условия, тя започва да доминира изискваната форма (група) микроорганизми, въпреки че чужди микроорганизми могат да присъстват в малки количества. Освен това, микроорганизмите са идентифицирани въз основа на техните морфологични и биохимични свойства. Друга особеност е мониторинг на наркотици, за да се определи тяхната антимикробна активност и нейното отстраняване преди анализа. Без възможност за откриване на резистентни само към наркотиците микроорганизмите, които изкривяват реалността и настоящото положение не позволява да се получат надеждни резултати.

Факторите, които да гарантират точността на резултатите от анализа от основно значение е теглото на пробата, т. Е. Количеството лекарство, взета за анализ. Колкото по-голяма от масата на пробата, на повече статистически достоверни изводи за отсъствие на патогени. Например, ако масата на пробата за анализ на 1-5 г предварително заразени лекарствени опортюнистични микроорганизми може да бъде открит само с няколко повторни анализи. Чрез увеличаване на масата на пробата до 10 г са били в състояние да получи положителен отговор от първия.

Друг фактор, който допринася за точността на отговора е качеството на средата. хранителната среда трябва да бъдат направени в строго съответствие с инструкциите на Глобалния фонд, компонент, съответстващ на изискванията за качество на ГОСТ. Те трябва да се съхранява при условия, които не допускат тяхното изсушаване или овлажняване, и тествани за свойства на растеж и стерилитет. Под свойства на растеж на хранителната среда да се разбере, способността да се осигури ефективно увеличаване на специални щамове на микроорганизми за изследване. На свойствата на растеж да се проверява всяка нова партида от среда. Стерилността се контролира от трето-mostatirovaniya проба, подготвена среда след стерилизация (взето от 5% от общия брой).

Третият фактор, който влияе на точността на отговора, е липсата на антимикробната активност на лекарството. За да се изключи предмети от навлизане на анализа на чуждите микроорганизми, анализът се извършва в строго асептични условия в специална стая, напълно изолирани от процеса на производство.

DL схема анализ не трябва антимикробно действие

В съответствие с изискванията на референтния документ в DL определяне на общия брой на бактерии и гъби, както и евентуалното наличие на опортюнистични патогени. За тази цел, 15 различни хранителни среди, всяка от които има определен брой (таблица. 28). Шофиране и методи за анализ са едни и същи за всички видове на DL, независимо от лекарствена форма (твърд, мек и течност). анализ верига се състои от следните стъпки:

• обогатяване на културите;

• първична диференциация (разделение на групи) в диференциално-диагностичен медиите;

• разпределението на "чисто" култури от микроорганизми;

• проучване на морфологичните и биохимични характеристики на изолирани култури;

• И накрая, наличието (отсъствието) на специфични култури въз основа на набор от атрибути.

Основният принцип на микробиологичен контрол е да се анализира така наречените селективни тестове и при трансфера на резултати от проверки на цялата серия или партида от лекарството.

Пробата е извадка от проби, взети от цялата маса на обекта, предмет на принципа на случайността за вземане на проби. Series (Shi страна) лекарство, наречено определено количество продукт, произведен при условия, които се приемат за постоянно. Основното изискване за серията (партията) е нейната хомогенност по отношение на качеството. За анализа на ХОГ от всяка серия (независимо от размера) средна проба, взета не по-малко от 50 г (мл), състоящ се от равни проби вземете взети от най-малко 10 различни пакети. Обща схема на един анализ се използва 30 г от лекарството: 10 г (мл) - за определяне на общия брой на бактерии и гъбички -mezofilnyh аеробни и факултативни анаеробни микроорганизми (MAFAM), 10 г (мл) - за определяне на микроорганизми от семейство Enterobacteriaceae (или Ешерихия коли и салмонела SPP.), 10 г (мл) -за определяне стафилококус ауреус и Pseudomonas Aeruginosa. В този случай, когато трябва да се потвърди резултата, повторно изпитване се провежда за конкретен раздел анализ на схемата, като се използва проба от 10 г (мл) от останалата част на средната проба.

Таблица 28

Списък и предназначение на хранителна среда, използвана при анализа на схемата на нестерилни лекарствени продукти

Името и номера на средна схемата Назначаване състав функция компонент Фактурирания функция, така че дисплеят
Сряда, 1 брой Количествено определяне на бактерии (MAFAM). Macromorphology и брои броя на колониите.
Сряда номер 2 Определяне на размера на дрожди и гъбички. Macromorphology и брои броя на колониите.
Сряда, 3 Брой с натрупване Сряда създава условия за преференциалното растежа на G "пръчки (растежа на бактериите се потиска T * направено на околната среда зелен малахит). Промяна на цвета на средата, признаците на бактериалния растеж.
Диференциална няма подобен диагностичната сряда съм номер 4 (ендо) Идентификация на бактерии от семейство Enterobacteriaceae, Ешерихия коли. Способността да ферментират лактозата, появата на червени (бледо розово) колонии с метален блясък (без обувки); растежа на микроорганизмите е съпроводено с промяна на средна цвят с ярко червено.
Разлика, не, сряда от диагностично номер 5 (vismutsulfit агар) Идентификация на ентеробактериите бактерии, Salmonella SPP. Черно (кафяви) колонии.
Сряда Общ брой 8 Натрупване на Pseudomonas SPP., Стафилококус ауреус. Промяна на цвета на средата, признаците на бактериалния растеж.
Разлика, не, сряда от диагностично номер 9 (глицерол) Идентифицирайте pyocyanin пигмент в Pseudomonas Aeruginosa. Промяна на цвета на средата с сиво-жълтеникава до синьо-зелено (синьо-зелено); колонии от сиво, кафяво.
Диференциална диагностика сряда няма номер 10 (с манитол) Идентификация на стафилококи. Външният вид на жълто, изпъкнали колонии, заобиколени от жълти зони в резултат на манитол ферментация.


Когато се изпитва по метода на мембрана от всяка партида на лекарството се взема средна проба от не по-малко от 6 г (мл), освен ако не е посочено друго в частни Pharmacopeia изделия. В зависимост от физическите свойства на лекарствена форма на пробата за анализ се приготвя като разтвор, суспензия или емулсия:

твърди дозирани форми, които са слабо разтворими преди смила като се използва оборудване, което изключва допълнително замърсяване от микроорганизми и се суспендира в буфериран с фосфат физиологичен разтвор рН 7.0 (или подходяща течна среда), запазвайки обемното съотношение на приготвяне: 01:20 обем на буферен разтвор;

течни лекарствени форми и твърди форми се разтварят в буфер получени като разтвори 1:10;

меки дозирани форми, неразтворим във вода, се емулгират предварително във фосфатен буфер рН 7.0 с добавяне на емулгатор (като например Tween - 80).

В рамките на подготовката за анализ с помощта на стъклени перли под механично разбъркване и пробата се нагрява до температура, която не надвишава 45 ° C. Получените проби се използват за определяне на общия брой на MAFAM и опортюнистични патогени, стандартизирани препарати в различни категории.

Количествено определяне на микроорганизми

Тестът се извършва от два слоя агар в блюда на Петри с. приготвен разтвор, суспензия или емулсия подготовката пипетата 1 мл от всяка от 2 тръби с 4 мл разтопи и се охлажда до 45-50 ° С среда № 1. Разбъркайте бързо съдържанието на тръбите и се прехвърля в съд, напълнен с 15-20 мл хранителен затвърди среден брой 1. с бързо поклащане на чаши разпределят равномерно най-горния слой на агар преди неговото втвърдяване. Плаките се инкубират 5 дни при 30-35 ° С

С този метод на засяване микроорганизми, съдържащи се в пробата се разпределя в тънък слой върху повърхността на средата, където условията са благоприятни за растежа на аеробни и анаеробни бактерии факултативни. Слой от хранителна среда, преди въведена в чашата, позволява дифузия на хранителни вещества за микроорганизми колонии кълняемост.

След инкубацията, два дни след засаждането и накрая отчита след 5 дни броят на бактериалните колонии на двете плочи са средната стойност и умножена по скоростта на разреждане за определяне на броя MAFAM 1 г (мл) на пробата.

За да се получат надеждни резултати, само помисли за тези чаши, в които се увеличиха до 300 колонии. Ако разреждане на лекарството, когато се поставят върху агар 01:10 никакъв растеж, заключи, че в 1 г от препарата съдържа най-малко 10 бактерии. Ако броят на колонии по-големи от 300, като поредица от серийни разреждания на пробата.

За да се определят общите лекарствени гъби заразяват върху средата № 2 се използва методът на двуслоен агар, както е описано по-горе.


Количествено освен ентеробактерии Ешерихия коли и салмонела SPP.

10 грама или 10 мл от пробата за изпитване се поставят в 100 мл №11, хомогенизират се и се инкубират при 32,5 ± 2,5 ° C за обикновено два часа, но не повече от пет. Ако лекарството - свещички или решения в масла, сряда № стерилен Tween 11 се добавя в количество от 80 до 5%, и стъклени мъниста за емулгиране.

Хомогенатът се смесват и се получава разреждане 1:10 и 1: 100, като се използва среда № 3. Три флакони с 10 мл среда № 3 направи 1 мл от хомогенат в първата, 1 мл от разреждане 1:10 и 1 мл от второто разреждане

1: 100 в третата, т.е., 0.1 грама, 0.01 г, 0.001 грам проба. Културите се инкубират при температура (32,5 ± 2,5) ° С в продължение на 24-48 часа. В присъствието на повторно засяване растеж прави линии върху твърда среда № 4 (ендо агар) и се инкубира в блюдо на Петри при същата температура в продължение на 18-24 ч. в случай на колонии, характерни за ентеробактериите-букви-отрицателни пръти определя броя на Enterobacteriaceae в 1 грам или 1 мл от пробата на масата. 29.

ТАБЛИЦА 29

Количествено определяне на Enterobacteriaceae

Размерът на проба за анализ Вероятната броят на бактериите в 1 г (мл)
0,1 гр (мл) 0,01 г (мл) 0,001 г (мл)
1 мл от хомогената 1 мл от 1:10 разреждане на хомогената 1 мл на хомогенност при разреждане 1: 100
+ + + Повече от 1000
+ + - От 100 до 1000
+ - От 10 до 100
- - - По-малко от 10

Легенда: + присъствието на бактериален растеж; - Липсата на бактериалния растеж

Брой на E.coli клетки в 1 мг (мл) на изследваното лекарство се определя с помощта на тази маса също.

Тест за наличие на Ешерихия коли и салмонела SPP.

10 г (мл) извадка от медикамент се въвежда в 100 мл средно 11 № (лактоза бульон). Ако лекарството - течната среда се редуцира до количество от 90 мл. Инкубира се при (32,5 ± 2,5) ° С в продължение на 5.2 часа 10 мл среда № 11 се разтваря в 100 мл среда № 3, смесва се и се инкубира при температура (32,5 ± 2,5) ° С в продължение на 18-24 часа. при липса на растеж на околната среда, брой 3 (прозрачната среда, цветът не се е променила), помисли, че лекарственият продукт не съдържа бактерии Sem. Enterobacteriaceae. Ако има растеж на изпитването да продължи.

Тестване на Е.коли

№ средно с 3 да се направи линия презасяване среда № 4 (Ендо агар) и се инкубират при температура (32,5 ± 2,5) ° С в продължение на 18-24 часа. В средносрочен № 4 форма Е.коли обикновено е характерно пурпурни колонии с метален блясък или без 2.4 мм. Предполага се, принадлежащ на E. Coli колониите mikroskopiruyut. При откриване на грам отрицателни пръти в петна се скринират за скосени тръби № 1 среда и се инкубира при температура (32,5 ± 2,5) ° С в продължение на 18-24 часа. От чиста култура тръби правят № субкултури на среда 14 (Simmons агар ) на брой 15 (Hottinger бульон), и също така се използва за тестване tsitohromoksi-оксидаза. След 18-24 часа инкубация при (32,5 ± 2,5) ° C марка бактериалния растеж или липсата на такова в медиите номер 14 и номер 15. Изхвърлете цитрат, определен от промяна на цвета на средносрочен брой 14 от зелено до синьо. Наличието на индол се определя от появата на червени пръстени на повърхността на средата номер 15 чрез добавяне на реагент или Ерлих Ковач.

Ако пробата е намерена Грам Non-спори ING пръчки, не притежават ензима цитохром оксидаза, не изхвърляйте натриев цитрат и образуват индол, вярваме, че наркотици, заразени с Ешерихия коли.

Тест за наличие на видове

1 мл културална среда обогатени № 3 поставят в епруветка с 10 мл среда № 12 (selenitovaya среда) и се инкубират при температура (32,5 ± 2,5) ° С в продължение на 16-18 часа. Направете примка на презасяване № 5 среда (бисмут сулфит агар) и се инкубират при температура (32,5 ± 2,5) ° С в продължение на 14-18 часа. В сряда 5 № Salmonella форми обикновено типични черни колонии с типичен метален блясък, със защита на земя за колония боядисани в черно. Предполага се, принадлежащ към колониите на Salmonella mikroskopiruyut и откриване на намазки грам-отрицателни пръчици, се изследват в сряда, брой 13 (trehsaharny агар с железни соли), което води до по-голям брой културни линия на първия скосена част от агар, а след убождане в колона. В същото време постави на изпитание цитохром оксидаза, с помощта на чиста култура със среден брой 1. След 18-24 часа инкубация при температура (32,5 ± 2,5) ° С бележка промяната на цвета на средата от червено до жълто само в средата на колоната. Потъмняването на средата показва образуването на сероводород -tipichnom подпише видове Salmonella.

Ако открити в пробата-Ing аспорогенен грам пръчки, които не са ензим цитохром оксидаза, и не ферментират лактоза и захароза отделят водороден сулфид, се смята, че лекарството е замърсена с Salmonella.

Откриване и идентифициране на Pseudomonas Aeruginosa и стафилококус ауреус

Приготвяне на проба № въведе сряда 8 (01:10) и се инкубира за 24-48 часа при 30-35 ° С След инкубационен субкултивирани върху среда

№ № 9 и 10 в блюдото на Петри. При липса на растеж в среда № № 9 и 10 след 24-48 часа инкубация извод отсъствието на микроорганизми в състава.

Ако имате среден брой 9 подозира Pseudomonas Aeruginosa колониите зеленикаво или сиво-зелено, прозрачно, плоски, с промяна в средносрочен цвят в синьо-зелено и има специфична миризма, поведение микроскопия. При откриване на грам-отрицателни пръчици проверява за tsitohromoksi-оксидаза.

Ако пробата е открит Грам Non-спори Екскурзоводско пръчки, които дават положителна реакция на цитохром оксидаза и образуващи синьо-зелен пигмент, а след това в процес на подготовка там Pseudomonas Aeruginosa бактерии и лекарството не е подходящ за употреба.

Ако имате средно номер 10 златисто-жълти колонии образувани от грам-положителни коки и заобиколени от жълти зони, сключва манитол ферментация. Чистата култура на Staphylococcus проверени за plazmokoagulazy ензим.

Ако пробата е открит Грам-положителни коки, манитол ферментиране и дава положителна реакция плазмен коагулация, а след това заразени лекарството Staphylococcus Aureus и до използването на неподходящи.

Методи за откриване на антимикробна активност на наркотици

Определяне на антимикробна активност се провежда веднъж на цялата гама от продукти, произведени в дадена промишленост. Някои лекарства имат изразен антимикробно действие във връзка с тяхната функция (за лечение на инфекциозни заболявания). Те включват антибиотици, лекарства, в състава на които са влезли антибиотици и лекарства за химиотерапия: сулфонамиди, nitrofuranovye производни, 8-хидроксихинолин, соли на тежки метали, деривати и други флуорохинолони. В допълнение, има редица лекарства, които могат да имат неспецифична антимикробно действие: киселини (например, ацетилсалицилова киселина), основи, алкохоли, окислители, препарати, съдържащи сяра, летливи етерични масла, витамини, аналгетици и други.

Метод за определяне на антимикробно действие е сравнение на скоростта на растежа на тестовите микроорганизми в присъствието и отсъствието на лекарство. Като тест микроорганизми използват определени щамове Bacillus Cereus, Ешерихия коли, стафилококус ауреус, Pseudomonas Aeruginosa, кандида албиканс и Aspergillus Нигер. Изводът за липса на антимикробно действие направя, когато се спазва същия темп на растеж на всички култури в експерименталните и контролни култури.

Отстраняване антимикробно действие на наркотици

DL препоръчва за тези методи:

увеличаване на работното разреждане на лекарството (поради големия обем буфериран с фосфат физиологичен разтвор);

добавяне на специфични инактиватори (например, Penicillium, наречен да б-лактамни антибиотици) или вещества, заменяйки антиметаболит (например, парабени към сулфонамиди);

Използвайте неспецифични инактиватори неутрализатори, особено за продукти с консерванти, като например 0.3-0.4% разтвор на Tween-80 и Tween 20; 0.1-0.5% разтвор на соев лецитин, хистидин, които преди това се въвежда в средата.

Ако всички тези методи са неефективни като лекарството е разтворим, използването на метод мембранна филтрация.

4. Безплодие лекарства

Целта на теста на стерилност е да се потвърди пълното отсъствие на жизнеспособни бактерии и гъбички в обекта. В някои случаи, например в производството на ваксина тестване пълната липса на вирус в обекта.

Анализът е предмет на всяка от страните на наркотици. По време на партито (серия) взема размерът на лекарството, за които вероятността за нарушение или невъзможност да се постигне същото стерилността. Надеждността на теста на стерилитет зависи от няколко фактора:

обем (маса) на пробата за анализ;

състава и качеството на културална среда;

използван метод на разследване;

съответствие с анализ асептични условия.

Обемът на пробата.

Поради факта, че е разрушителен метод за изпитване, са взети за анализ неизгодно голям брой проби, обаче, съществува риск неадекватен отговор на тестване, ако броят на пробите на малки серии на голям обем. Размер на селективна набор проба в зависимост от вида на стерилизация и броя на единиците в серия. Если лекарственное средство стерилизуют паром под давлением 0,11±0,02 МПа и температуре 121 °С, то образец состоит из 10 единиц, независимо от числа образцов в серии. При других видах стерилизации минимальное количество образцов определяют по формуле:

n = 0,4N

где: п - число единиц для анализа; N-число единиц в исследуемой серии, при этом п должно быть не менее 3 и не более 40.

Качество питательных сред. Питательные среды должны быть максимально пригодны для контроля микроорганизмов, т. е. учитывать различные потребности, обеспечивающие прорастание клеток, хотя известно, что универсальной среды практически быть не может. По современной НТД применяют жидкие питательные среды тиогликолевую и Сабу-ро, а для иммунобиологических - только тиогликолевую. Эта среда обладает некоторыми преимуществами: снижает окислительно-восстановительный потенциал и способствует росту анаэробных микроорганизмов, обеспечивает рост грибов, нейтрализует антимикробное действие некоторых консервантов.

Контроль качества питательных сред проводят путем проверки стерильности и ростовых свойств для доказательства отсутствия торможения роста. В качестве тест-микроорганизмов для тиогликолевой среды используют определенные штаммы Bacillus subtilis, Clostridium sporogenes, Staphylococcus aureus, Escherichia coli. Для проверки ростовых свойств среды Сабуро используют Candida albicans.

Для контроля стерильности проверяют 5 % от партии приготовленной питательной среды путем выдерживания в термостате при температуре 30-35 °С 48 ч для тиогликолевой и 20-25 °С 70-72 ч для среды Сабуро.

Метод анализа. Контроль стерильности можно проводить двумя методами: прямым посевом образца в питательные среды и мембранной фильтрацией. При прямом посеве испытуемый препарат предварительно растворяют или суспендируют и вносят в среду в количестве, зависящем от объема содержимого одной единицы: если в ампуле 1 мл, то весь объем, для ампул объема \-\ мл засевают 1 мл, если объем составляет 5-19 мл -2 мл, для объема 20-100 мл - 2-4 мл, а при анализе содержимого флаконов объемом более 100 мл предпочтительным является метод мембранной фильтрации. Объем питательной среды должен в 10 раз превышать объем образца для посева.

Посевы втиогликолевую среду инкубируют при температуре 30-35 °С, а в среде Сабуро - 20—25 °С. Продолжительность инкубации 14 суток.

Интерпретация результатов. Посевы просматривают ежедневно и по окончании периода инкубации. Наличие роста микроорганизмов оценивают визуально по появлению мутности, пленки, осадка и других признаков микробного роста. Выявленный рост подтверждают микроскопией мазков, окрашенных по Граму. Препарат считают стерильным при отсутствии роста микроорганизмов. При обнаружении роста хотя бы в одной пробирке (колбе) испытание проводят повторно на таком же количестве образцов. При отсутствии роста испытуемый препарат считают удовлетворяющим требованиям. В случае роста микроорганизмов при повтором посеве, морфологически сходных с микроорганизмами, обнаруженными в первичном посеве испытуемый препарат считают нестерильным. Если выявлена другая морфологическая группа, то испытание проводят в третий раз на удвоенном количестве образцов. При отсутствии роста в третьем испытании препарат считают стерильным. Если хотя бы в одной пробирке обнаружен рост, испытуемый препарат считают нестерильным.

метод стерилитет тест на мембранна филтрация. Изпитването се провежда, като се използва отворена или затворена система. При изпитване в отворена система, която използва мембрана филтродържатели и диаметър 47 мм. Методът се основава на филтриране на пробата през мембрана с пори от 0.45 микрона при скорост, която не позволява изтичане на микроорганизми. При тестването на лекарства с антимикробна активност след филтрация, старателно измити решение мембрана, обемът на които е определен предварително. Предварително експериментално определяне на вида и количеството на течността измиване необходимо за пълното отстраняване на антимикробни вещества. Пълнотата на миене на мембраната могат да бъдат проверени чрез тест биологични микроорганизми или HPLC. Мембраната след измиване се разтваря в 2 мл ацетон и за оценка на присъствието на антимикробни вещества.

В анализите за стерилитет целесъобразно да се използват мембрани, изработени от инертни полимерни материали не взаимодействат с антимикробни агенти. мембрана с хидрофобна мембрана се използва за предотвратяване ръб изтичане на течност, за да се филтрира. След филтруване, мембраната се намали наполовина със стерилни ножици и се поставя в едно парче тиогликолова среда, а другият в Sabouraud среда, последвано от инкубиране в продължение на 7 дни при споменатите по-горе температури. Едновременно с това, контролът върху асептична посяването. Те използват същия стерилно растение, което се пропуска през стерилен течен и умишлено посяват. В същото време поставя контрола в отсъствието на следи от анти-микробни вещества. След като мембраната във флакона с околната среда, суспензия, съдържаща приблизително 100 клетки на микроорганизми за изпитване. Ако кълняемост сключва премахването на антимикробно действие.

Тестване за стерилитет в затворена система "Steritest" извършва за продукти със силно антимикробно действие и като обем от 100 мл (инфузионни разтвори). Предимствата на метода на мембранна филтрация са:

1) висока ефективност на откриване на микробно замърсяване при ниски концентрации в една проба от клетки с възможността да държи или концентрат мембраната дори единични клетки чрез преминаване на голям обем от състава;

2) висока надеждност откриване на не-стерилност на антимикробни средства поради липса на разреждане, което се случва, когато отстраняването на антимикробна активност;

3) намалената ставка от гледна точка на изпитването.

Ограничения на метода на мембранна филтрация са необходимостта за тестване при строго асептични условия (като се използва отворена система), необходимостта да се използва ефективно оборудване, мембранни материали, както и повишените изисквания на персонала.

<== Предишна лекция | На следващата лекция ==>
| Микробиологичната чистота на крайни фармацевтични продукти

; Дата: 26/05/2015; ; Прегледи: 1061; Нарушаването на авторските права? ;


Ние ценим Вашето мнение! Беше ли полезна публикуван материал? Да | не



ТЪРСЕНЕ:


Вижте също:



zdes-stroika.ru - Studopediya (2013 - 2017) на година. Тя не е автор на материали, и дава на студентите с безплатно образование и използва! Най-новото допълнение , Al IP: 66.249.93.155
Page генерирана за: 0.055 сек.