Notice: Undefined offset: 60 in /var/www/agru1/data/www/ailback.ru/index.php on line 154
Virus реакция неутрализация като един от основните методи, използвани в диагностиката на методи вирусни инфекции РЕЗЮМЕ спиране
Studopediya

КАТЕГОРИЯ:


Астрономия- (809) Биология- (7483) Биотехнологии- (1457) Военное дело- (14632) Высокие технологии- (1363) География- (913) Геология- (1438) Государство- (451) Демография- (1065) Дом- (47672) Журналистика и СМИ- (912) Изобретательство- (14524) Иностранные языки- (4268) Информатика- (17799) Искусство- (1338) История- (13644) Компьютеры- (11121) Косметика- (55) Кулинария- (373) Культура- (8427) Лингвистика- (374) Литература- (1642) Маркетинг- (23702) Математика- (16968) Машиностроение- (1700) Медицина- (12668) Менеджмент- (24684) Механика- (15423) Науковедение- (506) Образование- (11852) Охрана труда- (3308) Педагогика- (5571) Полиграфия- (1312) Политика- (7869) Право- (5454) Приборостроение- (1369) Программирование- (2801) Производство- (97182) Промышленность- (8706) Психология- (18388) Религия- (3217) Связь- (10668) Сельское хозяйство- (299) Социология- (6455) Спорт- (42831) Строительство- (4793) Торговля- (5050) Транспорт- (2929) Туризм- (1568) Физика- (3942) Философия- (17015) Финансы- (26596) Химия- (22929) Экология- (12095) Экономика- (9961) Электроника- (8441) Электротехника- (4623) Энергетика- (12629) Юриспруденция- (1492) Ядерная техника- (1748) Arhitektura- (3434) Astronomiya- (809) Biologiya- (7483) Biotehnologii- (1457) Военни бизнесмен (14632) Висока technologies- (1363) Geografiya- (913) Geologiya- (1438) на държавата (451) Demografiya- ( 1065) Къща- (47672) журналистика и смирен (912) Izobretatelstvo- (14524) външен >(4268) Informatika- (17799) Iskusstvo- (1338) историята е (13644) Компютри- (11,121) Kosmetika- (55) Kulinariya- (373) културата е (8427) Lingvistika- (374) Literatura- (1642) маркетинг-(23702) математиците на (16968) Механична инженерно (1700) медицина-(12668) Management- (24684) Mehanika- (15423) Naukovedenie- (506) образователна (11852) truda- сигурност (3308) Pedagogika- (5571) Poligrafiya- (1312) Politika- (7869) Лево- (5454) Priborostroenie- (1369) Programmirovanie- (2801) производствено (97 182 ) индустрия- (8706) Psihologiya- (18388) Religiya- (3217) Svyaz (10668) Agriculture- (299) Sotsiologiya- (6455) на (42831) спортист строително (4793) Torgovlya- (5050) транспорт ( 2929) Turizm- (1568) физик (3942) Filosofiya- (17015) Finansy- (26596) химия (22929) Ekologiya- (12095) Ekonomika- (9961) Electronics- (8441) Elektrotehnika- (4623) Мощност инженерно ( 12629) Yurisprudentsiya- (1492) ядрена technics- (1748)

Virus реакция неутрализация като един от основните методи, използвани в диагностиката на методи вирусни инфекции РЕЗЮМЕ спиране




отговор

Принципи специфична имунотерапия и профилактика на вирусни инфекции. Антивирусните лекарства за химиотерапия, механизми на антивирусно действие. Вирусни видове ваксини примери.

отговор

Отговор.

отговор

Придобити антивирусно имунитет действа специфично за конкретен патоген.

Един от най-важните механизми за защита на специфични антивирусни отговори имунни клетки се извършват от Т-ефектори, където основната роля играе цитотоксични клетки, CD8 + Т-убийци (). Вирусен антиген индуцирана Т клетки придобиват свойства разпознават вирусни антигени, експресирани на повърхността на инфектираните клетки във връзка с хистосъвместими антигени на първа класа. вирусната репликация огнища на концентрирани Т-убийци и да причинят цитолиза на заразените клетки без участието на специфични антитела.

Цитолитична ефект на играе водеща роля:

-protiv вирус освободен от пъпкуване

-С инфекции, в които вирусът се разпространява през мембраната на съседните клетки.

-protiv клетки, инфектирани с онкогенни вируси.

Само в инфекции, при които вирусът бързо унищожи засегнатите клетки (аденовирус), клетъчния имунитет няма значение.

В-клетки играят важна роля в специфичен хуморален имунитет. При контакт с антиген се превръщат в плазмени клетки, способни да произвеждат антитела. Те могат също така да служи като антиген-представящи клетки, производство на цитокини.

Специфични антитела.

Антитела-специален вид протеини, които се произвеждат в отговор на антигена и имат способността да се свързват специфично с хомоложния антиген.

Към извънклетъчния вирус .Osuschestvlyayut пространствен блокада на свързване на вирусни протеини, предотвратяване на свързването на вириона към клетъчните рецептори. Вирусният неутрализация трудно разположени комплекс между антитялото и вириона причинява активиране на системата на комплемента. Според класическия начин. Антителата, свързани с вирусни частици, opsonizing фагоцитоза.

В вътреклетъчен вируса. Способност да причиняват разрушаване на клетки, инфектирани с вируса, активиране на системата на комплемента, което води до лизис на нея (появява само при висока експресия на вирусни антигени). При ниски генната експресия най-ефективна защита на антитяло-зависима клетъчна цитотоксичност. Така имуноглобулини се свързват с клетки, след свързването на нормалните клетки убийци, макрофаги, които излъчват perforins, което води до клетъчен лизис.

Местно имунитет се формира в най-вероятната портална врата infektsii по кожата и лигавиците. Слизестите секрети контролирани секреторна имуноглобулин А. Задачата: осигуряване на местния имунитет в рамките на тъканта.



-Е първата линия на защита

-с развитието на инфекции проследи прехода от местен имунитет в генералът

е постоянен обмен на фактори на имунитета (антитела) между местна и обща имунитет.

Раздел вирусология Въпрос 7.

Интерфероните: класификация, биологични свойства. Интерферон индуктор. Механизмите на антивирусно действие на интерферони. Принципите на получаване и приложения на интерферони.

Интерфероните са основните антивирусни хуморален специфични фактори.

1. Алфа-интерфероните са произведени от левкоцити. Основни биологични свойства - потискане на синтеза на вирусни протеини;

2. interferony- бета фибробласти има антивирусна активност чрез инхибиране на размножаването на вирусите и клетки tsitotokicheskih активност се увеличава.

3. гама-интерферон, произвеждан от Т-лимфоцити след тяхното активиране. Той инхибира специфичен имунен отговор чрез повишаване на активността на NK клетки и макрофаги.

Биологични свойства: ⎫

показват видовата специфичност - активен човешки интерферон и има ефект само в човешкото тяло;

-okazyvaet универсален инхибиращ ефект както върху ДНК и на RNKgenomnye вируси, но различни вируси различно на IFN чувствителна;
-immunomoduliruyuschee действие - засилване на фагоцитозата, увеличаване на активността на NK-клетки, специфични цитотоксични клетки;
- Антитуморна активност;

- Са слаби антигени

Универсален механизъм на действие на интерфероните е унищожаването на вирусната РНК и блокиране стъпка белтък превод започване.

Интерферон индуктор.

Добавянето на екзогенен интерферон за лечение и превенция на употребата на наркотици, които предизвикват производството на ендогенни интерферони клетки на организма. Тези лекарства, наречени интерферон индуктор. Те са различен химичен характер, изрекох имуномодулиращи свойства. Различните лекарства индуктори причиняват максимално натрупване на IFN в някои органи и тъкани, което позволява използването им за лечение на специфично инфекция. Тези лекарства не са намерили подходящо място в лечението и превенцията (в сравнение с екзогенен IFN), но притежават редица предимства: разнообразен спектър вече съхранява в тялото без странични ефекти. За получаване никъде не казва нищо !!!!

Раздел вирусология Въпрос 8.

Принципи за лечение на вирусни инфекции. Антивирусни лекарства: единици, механизми на действие, ефикасност.

1. Антивирусна химиотерапия е на etiotropic лекарства, които влияят на отделните звена на възпроизвеждането на някои вируси, като по този начин предотвратява тяхното размножаване. В сила за ограничен брой вирусни инфекции (херпес, ХИВ и др ..). В продължение на много вирусни инфекции etiotropic означава отсъства. Те имат тесен спектър на действие. Често развиват резистентност към тях. Не давайте гаранция за пълно освобождение от вируси. Следователно, те са далеч от съвършенство. Трябва да се използва в комбинация с други лекарства.

2. интерфероните (екзогенни). Насладете се на широк набор от действия, които не развиват резистентност към тях.

-INF 1-ви generation- естествен, извлечен от култури на кръвни клетки и клетки, третирани с неопасни да човешките вируси. Или с други индуктори на IFN.

-INF Второ поколение - рекомбинантен разработен с помощта на генното инженерство.

3. Освен това екзогенен интерферон за лечение и профилактика, използвайки лекарства, които индуцират производството на ендогенни интерферони клетки на организма. Тези лекарства, наречени интерферон индуктор. Те са различен химичен характер, изрекох имуномодулиращи свойства. Различните лекарства индуктори причиняват максимално натрупване на IFN в някои органи и тъкани, което позволява използването им за лечение на специфично инфекция. Тези лекарства не са намерили подходящо място в лечението и превенцията (в сравнение с екзогенен IFN), но притежават редица предимства: разнообразен спектър вече съхранява в тялото без странични ефекти.

4. имуномодулатори - вещества, които могат да влияят върху имунната система, като стимулира или инхибиране. Тази широка гама от химически съединения, които се разделят на:

IMP -endogennye цитокини (интерлевкини, интерферони и т.н.).

MI -ekzogennye естествен произход (някои ваксини, различните компоненти на микроорганизмите, и т.н.).

-ekzogennye MI синтетичен високо и ниско молекулно тегло (полифосфати, polysulfates и др.)

IM се използва в комбинация с други лекарства, предимно за дългосрочни настоящите заболявания.

Раздел вирусология Въпрос 9

Vaktsiny- имунобиологични препарати, получени от живи атенюирани или инактивирани организми, техните антигени и се използват за създаване на специфична активност изкуствен имунитет.

По принцип, те се използват профилактично и лечебно понякога.

1. Живи ваксини, приготвени от атенюирани вируси. Те се получават чрез пасажиране на malovospriimchiva животни в пилешки ембриони. Те имат висока имуногенност (имунната система образува дълго зает), просто въведете (една инжекция), може да се образува и местен имунитет. В същото време те са много дълго priluchat не се елиминира опасността от реверсия на вирулентността на щама на ваксината, може да има усложнения. Противопоказно за хора, които страдат от имунен дефицит. Примери: полиомиелит, грип, морбили, рубеола, паротит.

2. инактивирани ваксини предизвикват хуморален имунен отговор. За препарат, използван техните вируси, съдържащи проективни антигени, които трябва да се поддържат активни от действието на физични фактори. Създаване на по-малко интензивна имунната система, да не се предизвиква местен имунитет, това отнема 2-3 пъти администрация. Насладете се на интоксикация и алергия. Никога не предизвика инфекциозно заболяване. Пример: бяс (бяс), инактивирана грип, пренасян от кърлежи енцефалит, хепатит А

3. Химически ваксина. Съдържат отделните структурни компоненти на вириона. Имуногенни и се понася добре, те имат ниска реактивност и алергизиращо действие, по-малко токсични. Адювантите са добавени за повишаване на имуногенността на ваксината агенти. Пример: противогрипна ваксина тривалентна полимер sudedinichnaya течност (Grippol)

10. Основи на методи за лабораторна диагностика на вирусни инфекции: микроскопичен, вирусологични, серологични, молекулярно-генетични. Характерни линии (откриване на вируси, вирусни антигени и нуклеинови киселини) и косвените (вирусологични, серологични) методи за лабораторна диагностика на вирусни инфекции. Информативен, предимства и недостатъци. Сравнителни характеристики методи.

Микроскопични методи в вирусология

1. електронна микроскопия на вируси, оцветени с отрицателна разлика от тях, ви позволява да се прави разлика между вируси и определи тяхната концентрация. Използването на електронна микроскопия при диагностицирането на вирусни инфекции е ограничен до тези случаи, когато концентрацията на вирусни частици в клиничната материал е доста висока. Недостатък на този метод е невъзможността да се прави разлика между вируси, принадлежащи към същата таксономична група. Този недостатък се отстранява с помощта на имунната електронна микроскопия. Методът се основава на образуването на имунни комплекси чрез добавяне на серум на специфични вирусни частици настъпва едновременно с концентрацията на вирусните частици, което им позволява да бъдат идентифицирани. Методът се използва също за откриване на антитела. За да се проведе бързо диагностициране на електрон микроскопско изследване на тъканни екстракти, изпражнения, течност от везикулите, тайните на назофаринкса. Електронната микроскопия е широко използван за проучване на морфогенезата на вируса, способността му да се разшири прилагането на маркирани антитела.

2. светлинна микроскопия

В светлинен микроскоп, можете да видите най-големите вируси и вътреклетъчни включвания в инфектирани с вируса на тъканите. Големи вируси, открити от осребряване на Морозов. За откриване на вътреклетъчни включвания приготвят хистологични секции на засегнатите тъкани, от наркотиците ударите. Обикновено препаратите се оцветяват с Романовски-Гимза. Най-голямо практическо значение е откриването на клетки Babes-Негри в нервните клетки на мозъка с бясна (препарати, оцветени от Turevichu Manu)

метод имунофлуоресцентен се основава на комбинацията от антигени със специфични антивирусни антитела маркирани, flyuorohromnym багрила. Получените комплекси произвеждат светят под флуоресцентна микроскопия.

2. вирусологични методи за разследване също се основават на имунологичните процеси (антиген взаимодействия с антитела), биологичните свойства на вируса (хемаглутинацията способности, хемолиза, ензимна активност) разполага вирус взаимодействие с клетката-гостоприемник (естеството на цитопатичния ефект, образуването на вътреклетъчни включвания т.н. ) .. метод вирусология включва култивиране на вируси, тяхната идентификация и индикация. Материали за вирусологично изследване могат да бъдат кръв, различни тайни и екскрети, тъканни проби на човешки органи и тъкани. Кръвните тестове често се извършват с оглед диагностициране на арбовирус заболявания. Слюнка вируси бяс могат да бъдат открити, паротит, херпес симплекс. Назофаринкса тампони служат за изолиране на грип на патоген, морбили, Rhinovirus, респираторен синцитиален вирус, аденовирус. Конюнктивалния тампони за откриване на аденовируси. Тъй изпражнения излъчват различни ентеровируси, аденовируси, ротавируси и реология. Преди интензивното развитие и прилагане на широка културна практика на метода се прилага тъканите и клетките, заразени опитни животни или ембриони на пиле. Тези методи се използват в момента. Идентификация с помощта на животински вируси най-целесъобразните в тези случаи, когато това е възможно да се възпроизведе картина на типичен експеримент, инфекциозно заболяване, или някои от неговите проявления. Следователно, агентите на групата арбовируса и Coxsackie могат да бъдат идентифицирани по време на инфекцията в мишки сукалчета мозъка, грип - по време на инфекция от пилешки ембриони или интраназално приложение на мишки на изпитвания материал.

3.Serologicheskaya диагноза въз основа на антиген - антитяло може да се използва за да се определи как тези и други, и играе роля при определянето на етиологията на вирусна инфекция, дори ако изолиране на вирус отрицателни резултати. За тези изследвания трябва да се вземат кръвния серум в острата фаза на заболяването и по време на възстановяване след боледуване (сдвоени серуми). Положителната реакция се счита за най-малко 4-кратно антитяло титър натрупване. Известно е, че повечето от специфичните класове антитела IgG и IgM, които се синтезират по различно време на инфекция. Това IgM антитела са по-рано, и тестове, използвани за тяхното определяне се използват за ранна диагностика (серумен изследва един е достатъчно). IgG антитела са синтезирани по-късно и дълги sohranyayutsya.Dlya пише вируси използват рН - неутрализация реакция при диагностицирането на група например, аденовирусен инфекция използване свързване с комплемент реакция (IAR). Най upotrebitelnymy са хемаглутинацията инхибиране (HAI), нови кредити, RIF, пасивната реакция и обратна пасивна хемаглутинация (PHA, ROPGA), различни варианти за ELISA, почти универсално замества с равно с него в чувствителност RIA.

4. молекулно генетичен метод

PCR се основава на принципа на естествената ДНК репликация. Методът се повтаря много пъти в циклите на синтез (амплификация) на вируса на специфични ДНК последователности с помощта на термостабилна Taq ДНК полимераза и два специфични праймера - т.нар praymerov.Kazhdy цикъл се състои от три фази с различни температурни условия. Във всеки цикъл удвояване на броя на копията от синтезира част. Новосинтезираната ДНК фрагменти служат като матрица за синтеза на новите нишки в следващия цикъл на амплификация, която дава възможност за 25-35 цикъла, за да се натрупват достатъчен брой копия на избрания ДНК област е да се определи, обикновено чрез електрофореза в агарозен гел.

високо специфични и високо чувствителен метод. Тя позволява на множество копия за откриване на вирусна ДНК в изпитвания материал. През последните години все повече PCR се използва за диагностициране и проследяване на вирусни инфекции (хепатитни вируси, херпес, цитомегаловирус, папилома вирус, и т.н.).

Директни методи - са методи, които могат да открият вируса, вирусен антиген или вирусна нуклеинова киселина (NA) директно към клиничната материал, който е най-бързите (2-24 часа). Въпреки това, поради редица особености на патогени директни методи имат своите ограничения (възможност за фалшиво-положителни и фалшиво-отрицателни резултати). Поради това, те често трябва да бъде потвърдена от косвени методи.

Косвени диагностични методи (определяне на антитела срещу патогена) - серологичен проучване чрез имуноензимен (ELISA) качествен и количествен анализ на IgM, IgG, IgA.

Директни методи: култура на вируса, проучване на р24 антиген, PCR.

Косвените методи: Имуноензимен анализ (ELISA), Имуноензимен анализ с ензимен етикет (ELISA), иму (СБ, Western блот), непряка immunofluo-ресцен- анализ (NIFA), метод радиоимунопреципитационен (RIP).

11.Metody култивиране на вируси в култивирани клетки, в кокоши ембриони, в организма на лабораторни животни. Техните сравнителни характеристики. Примери за вируси

Основните методи на отглеждане на вируси.

1. в организма на лабораторни животни.

2. пилешки ембриони.

3. В клетъчни култури.

За отглеждане на вируси използват култура клетки, пилешки ембриони и чувствителни лабораторни животни. Същите методи се използват за култивиране Rickettsia и Chlamydia - задължат вътреклетъчни бактерии, които не растат на изкуствена среда.

Клетъчни култури. Клетъчна култура, получена от човешки или животински тъкани. Културата е разделен на първичен (neperevivaemye) poluperevivaemye и трансплантирани.

Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови.

Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей.

Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться in vitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др.

К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.

О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.

Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности.

Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.

Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.

Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6—7-дневной инкубации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз.

Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц является метод бляшек.

Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.

Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям.

Для получения чистых культур риккетсий, хламидий и ряда вирусов в диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его оболочках.

О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.

К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препаратов.

Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных к определенному вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки — к вирусам Коксаки).

Предимството на този метод върху друга е възможността за избор на тези вируси, които са добре възпроизведени в култура или ембриони. Своите недостатъци включват замърсяването на тялото в лабораторни животни чужди вируси, микоплазми и необходимостта от последващо заразяване на културата клетките за генериране на чисти линии на вируса, който удължава изследването.

12.Osnovnye видове тъканни култури. Характеристики на различни видове еднослойни култури. индикация и идентификация на вируси в клетъчно културални техники.

Основните видове тъканни култури

7. култура на дълготрайни парченца тъкан (plazmirovannye култура)

Парчета от мляно тъкан са били поставени в пилешко плазмен съсирек формиране, в които тези тъкани са фиксирани.

2. еднослоен клетъчна култура

Културата е разделен на първичен (neperevivaemye) poluperevivaemye и трансплантирани.

Получаване на първична клетъчна култура се състои от няколко последователни етапа: рязане на тъканта, отделяне на клетки чрез трипсинизация, прането Получената хомогенна суспензия от клетки, изолирани от трипсин, последвано от суспендиране на клетки в хранителна среда, осигуряване на техния растеж, като 199 среда, допълнена с телешки серум.

Непрекъснато култура, за разлика от първичния адаптирани към условията за осигуряване на по-нататъшното съществуване на тяхната ин витро, и се задържи за няколко десетки пасажи.

Трансплантируеми клетъчния монослой култури, получени от нормални и злокачествени клетъчни линии, които имат способността да се размножават ин витро дълго при определени условия. Те включват ракови клетки HeLa, първоначално изолирани от цервикален карцином, НЕр-3 (от лимфоидна карцином) и нормални човешки амнион клетки, маймунски бъбрек и др.

3. Култура клетки на тяхното спиране

Окачен култура - култура, в която отделни клетки или техни конгломерати са спрени за постоянно

Указание При инфекция на клетъчни култури с вируси могат да получат различни видими прояви на вируса:

1. цитоплазмен ефект на вируса в клетъчна култура

(СРЕ), т.е. поява на видими морфологични него

дегенеративни промени.

2. Придобиване на способността на инфектираните клетки култура

да gemadsorbtsii, т.е. адсорбция на повърхността на червените кръвни клетки

клетъчен слой.

3. Обучение в заразената клетка култура под

дебел слой специално покритие характеристика на агар

плаки, които са "отрицателни колонии" вируси.

Инхибирането на метаболитните процеси в инфектираните вируса на клетъчна култура, генерирани от така наречените "цветни проби" (цветна реакция).

Тези прояви на действието на вируса в клетъчни култури и са основните критерии, с което на дисплея се извършва вирус, който се открива присъствието си и да се установи количествено съдържание на вируса, определянето на неговата титър.

Различните вируси преобладават тези или други прояви на тяхното действие върху клетъчни култури, които се използват за предварително идентифициране на вируса.

Идентификация. Окончателното определяне на изолиран вирус се извършва чрез неутрализация с диагностичен неутрализиращо серуми. След предварителен контакт на вируса с серума, сместа зарази клетъчна култура и съди последвалата неутрализацията, показващо съответствие с вируса и серум от едни и същи критерии. Вирусният специфичен серум неутрализира:

1. Не трябва цитопатичен ефект - настъпва

неутрализация реакция (инхибиране) цитопатичен ефект.

2. няма реакция gemadsorbtsii - реакция настъпва

gemadsorbtsii закъснение.

3. Не давайте на зъбната плака (или значително

намалява техния брой) - реакцията на неутрализация се случва

образуване на плаки.

4. Не предизвиква потискане на клетъчния метаболизъм,

открит в реакцията на неутрализация чрез проби цвят.

По този начин, да извършва идентификация серологично на вируси, определи потомствен и типичната им идентичност.

Откриване на антитела. Същият принцип се поставя реакционната неутрализация за определяне на неизвестно антитяло в серума на пациента. В този случай, изследвани серум се смесва с известно вирус, след горните методи определят - дали е реакцията на неутрализация. Положителната реакция показва, че серумните антитела са взети, за да се съобразят с опита на един известен вирус.

Цитопатичен ефект (СРЕ) на вируса в клетъчна култура

Чрез цитопатичен ефект разбират набор от морфологични и функционални (включително биохимични) промени в клетките под влияние на срещащи вирус взето корен.

клетъчна реакция към вирусната инфекция може да се прояви като остра вирусна инфекция, латентна инфекция, клетъчна трансформация. През изразена клетъчен отговор в остра вирусна инфекция. Предполага се, че основната причина за CPP е метаболизъм нарушение клетка. Прекратява РНК синтез на клетката гостоприемник, което води до инхибиране на синтеза на протеини, води до нарушаване на клетъчната мембранна структура, лизозоми, митохондрии. Освободени и активира клетъчните ензими (лизозомни), които причиняват разрушаване на клетъчните компоненти, т.е. развитие на CPP.

Ако бърза дегенерация на надупчената клетъчен монослой: клетките ексфолира от стъклото и се движат свободно в течна kulturalnoy като неструктурирани зърна.

Цитопатичен ефект на вируса на клетъчния монослой за chetyrehkrestovoy разгледа системата: "++ - Н" - общата загуба на клетъчна култура; "+++" - Клетъчен слой отсъства, но единични клетки не са засегнати от вируса; "++" -degenerativnye Промени се наблюдават при 50% от клетъчната култура; "+" - Дегенеративни промени са отделни монослойни клетки, предимно в крайните участъци.

Simplastoobrazovanie. При остра вирусна инфекция може да се случи, и малко по-различен вид на цитопатичен ефект - образуването на гигантски многоядрени клетки -simplastov (или синцитий). Simplastoobrazovanie причини повече от 20 различни вируси на lecithinase ензим невраминидаза и богат lshschtsami (главно парамиксовируси). Ензимите действат върху културните клетки черупката еднослойни в резултат на клетъчно сливане в гигантски многоядрени синцитиуми.

Включвания. Като проява на цитопатичния ефект на вируси е образуването на вътреклетъчни включвания. Те се образуват, ако вирусът не причинява клетъчна смърт, или на етапи преди смъртта. Включва образование може да бъде проявление Edistvennoe реакционни клетки за въвеждане на вируса.

Латентен вирусна инфекция на клетъчната култура се характеризира с размножаването на вируса в отсъствието на изразено цитопатичен ефект.

Трансформацията на клетките се извършва в клетъчна култура, заразени с онкогенни вируси, които под действието на клетките започват да се разделят неконтролируемо и монослой не са разположени произволно и растат в няколко слоя. При заразяване на култура на животно, може да е злокачествен тумор.

Индикация на вируса на своя цитопатичен ефект, с цел откриване на вируса в материалите на пациентите извършва на инфекция учи монослой клетъчна култура материал. За да се зарази избрани тръби с непрекъснат слой клетки, да ги гледане под ниско микроскоп с увеличение. Преди инфекция на тръбите kulturalnugo пълнене течност, и след това 0,1 мл, но се правят на материала и се добавят среда (която поддържа без серум) до 1 мл. Всяка проба материал се въвежда в 4 тръби. За да се контролира броят на тръби остава неизменен, но и да ги замени в хранителна среда. Епруветките се инкубират, обикновено при 37 ° С, и ежедневно MD копирани за откриване на СРЕ (за една седмица или повече).

Дегенеративни промени в клетъчния слой не е по-малко от два кръста ( "++") в отсъствието на такъв не-инфектирани култура е признак за наличието на вирус в изпитвания материал.

Цитопатичен ефект на различните вируси в клетъчната култура (дори ако вземем различните видове култури) има определена специфика Свързани вируси обикновено се дават tsitolaticheskuyu реакция подобен тип действие далечна от вирусни свойства, ефектът от разликата, така че видът на CPE често може да се съди за семейство или род да което включва вирус учи.

По този начин, за ентеровируси (полио вируси, коксаки, ECHO) CPE характерни като глоба унищожаване на хомогенна клетъчна, клетките стават закръглена форма разположени сравнително равномерно. За типичен аденовирус CPE е трансформацията на клетъчен слой в групите на малки, кръгли клетки, подредени във формата на гроздове. Вируси параинфлуенца, респираторен синцитиален, морбили и заушка вируси предизвикват образуване цитопатичен ефект simplaotov.

Има и други прояви на цитопатичния ефект на вируси, не толкова типично.

Титруване на вируса от цитопатичен ефект.

Количествено определяне на вируса в изпитвания материал е титруване. За тази цел се приготвя 10-кратни серийни разреждания на вирус, който инфектира клетъчни култури (вземат 4 тръби за всяко разреждане). Останалата част от метода на вируса титруване CPP е различен от горния метод за откриване на СРЕ вируса.

Virus титър го наричат ​​най-високото разреждане, което причинява CPE в култури, заразени половината (т.е. 2 от 4 епруветки с разреждането на вируса). Вирусният титър се изчислява по метода на Reed и Muench. Вирусният титър се изразява като цитопатичен доза (TsPD5o) в 1 мл. За един PDDzo вземе ОВ мл вирусна материалите, съдържащи се разрежда до титър.

Идентификация на изолиран вирус чрез неутрализиране на СРЕ. Вирусът съдържа материали, подлежащи на идентификация, обикновено течна култура от епруветките с клетъчна култура, която даде на CPP по време на инфекция тестов материал.

За течност култура на експеримента (с определена доза TsPD5o вирус) се смесва с равен обем от диагностичен имунен серум (отглеждане Вземете syvortki 1: 5 или 01:10). След 1-2 часа контакт при стайна температура, сместа (0.2 мл) се инокулира с култура тръба 4 клетки от който културалната среда е отстранена по-рано; След добавянето, сместа се прави в епруветки 0.8 мл прясна среда. Обикновено, проби от културалната течност се проверява с няколко типични серуми. Опитът е придружен от няколко контроли: I) контролира незаразени култура; 2) контролиране на доза на вируса - клетъчни култури, заразени със същата доза от вирус, който в експеримента; 3) смес контролна култура заразени културална течност с нормален серум.

Насладете се отчита в продължение на 5-7 дни или повече, търси тръби под ниско микроскоп увеличение. В първата контрола CPP трябва да бъде предвидена във втората и третата - задължителната дисплея на CPP. Липса на цитопатичен ефект в епруветки показва, че в пробата наблюдава имунен серум неутрализация на вируса, т.е. Серум за вида на изолиран вирус.

По същия начин, титруване се извършва неутрализиращи антитела в серума на пациента. Подготовка двукратни серийни разреждания на серум са смесени и всеки от тях със стандартна доза известен вирус (100, 1000 TSPD50) след 1-2 часа експозиция със смес от инфектирани клетъчни култури.

серумен титър се нарича най-високото разреждане, която напълно инхибира вирус CPE половината взети в опит култура (т.е. 2 тръбите 4, който се проверява, всеки серум разреждане).

реакционни gemadsorbtsii

Gemadsorbtsiey е способността на клетъчни култури, заразени с някои вируси, за да се адсорбира червени кръвни клетки.

Това явление е открит в културата на клетки, заразени с грипен вирус. По-късно е установено, че свойствата са haemadsorbing много вируси (например, орто и парамиксовируси, флавивируси, поксвируси), тези вируси имат същата способност да причини еритроцити gemagtlyutinatsiyu -skleivanie. Gemadsorbtsiya и хемаглутинацията имат подобен механизъм (виж гл. 5). Придобиване на способността да gemadsorbtsii поради вмъкване в мембраната на клетките, инфектирани с вируса (в частите на бъдещето "обещаващ" вируси) вирус-специфични протеини - хемаглутинин, еритроцитите, които имат допълнителни рецептори и следователно са адсорбирани върху повърхността на инфектираните клетки.

В реакцията използва морско свинче еритроцити, пиле, маймуна, човешки O (I) група.

Най-активни в еритроцитите gemadsorbtsii реакции са чувствителни към действието на вируса хемаглутиниращ.

Откриване на вируса в gemadsorbtsii реакция. Вирусно инфектирани клетки придобиват способността да gemadsorbtsii дълго преди появата на цитопатичните промени в тях, така че можете да използвате gemadsorbtsii реакция за ранно откриване на вируса в заразената култура.

В присъствието на явлението gemadsorbtsii откриване на наличието на вируси в клетъчни култури с латентна инфекция при цитопатичен ефект е слабо изразено или липсва напълно. Латентна инфекция на клетъчни култури могат да причинят аденовирус, параинфлуенца, херпес вирус и други.

Техника реакция настройка gemadsorbtsii._

Предварително клетъчни култури се инокулират с изпитваното вещество, както е описано по-горе. gemadsorbtsii Реакционните поставени на всеки два дни, докато положителна реакция (8-10 дни). За тази цел тръбата съдържащ заразената култура (понякога след отстраняване среда) Прехвърлят се с пипета 0,2 мл еритроцитна суспензия (0.4% -1%) и епруветките се инкубират в наклонено положение, така че червените кръвни клетки в контакт с клетъчен слой.

Температурата, при която постави на опита и експозицията зависи от вида на вируса. При формулирането на реакцията поксвируси, тест енцефалитни вируси се извършва за 15-30 минути при стайна температура. При провеждане на реакцията с орто-и парамиксовируси е достатъчно излагане на 3-5 минути.

След това тръбата се леко се разклаща и се оставя за известно време в изправено положение, за да не утаяване на еритроцитите адсорбирани. В микроскопия при ниско увеличение в епруветка регистър gemadsorbtsii положителна реакция, която се изразява във факта, че червените кръвни клетки се адсорбират по култура клетки, прилепнали към клетъчен слой; ин витро тест клетъчен слой безплатно на еритроцитите.

С положителен gemadsorbtsii клъстери на червени кръвни клетки в клетките може да бъде доста отличителен. Грипният вирус дава gemadsorbtsiyu тип островче: парагрипни вируси -diffuznogo; за поксвируси характеристика е мястото на червените кръвни клетки около клетките под формата на венче или гердани.

gemadsorbtsii реакция най-често се използва за ранно откриване на параинфлуенца вируси в назофарингеални натривки на пациентите. Реакцията се използва и за титруване на вирусите и откриване на специфични антитела.

Идентифициране на вируси в reaktsiizaderzhki gelshdsorbtsii. Установено е, че добавянето на специфичен имунен серум в клетъчна култура тръба, предварително инфектирани със съответните инфектирани с вирус клетки губят способността си да абсорбират еритроцитите, т.е. съществува феноменът на забавяне gemadsorbtsii. Поради специфичността на това явление, gemadsorbtsii реакцията на забавяне може да се използва за идентифициране на изолиран вирус, както и за откриване и титруване на неутрализиращи антитела в серума на пациенти.

реакцията на неутрализация се базира на способността на специфични неутрализиращи антитела да блокират инфекциозен, хемаглутиниращ, haemadsorbing, цитопатичен, образуващи плака и други. свойства на вируси.

Той се използва по два начина:
1) за идентифициране на вируси;
2) за serodiagnosis на вирусни инфекции, т.е. за определяне на растежа на титър на неутрализиращите антитела в "сдвоени" серуми.


компонента:
1. Вирусът на тест (за идентифициране на изолиране на вируса) или серум тест (за serodiagnosis на инфекция).
2. Диагностично (gruppe-, формообразуване, тип-специфични) серум (в идентифицирането на вируса) или известен вирус - диагностичен комплект (за serodiagnosis).
3. Индикатор обект: животни, пилешки ембриони, тъканна култура, или червените кръвни клетки.

неутрализация сложи в клетъчни култури от пилешки ембриони и в лабораторни животни.

Принцип. Смес на вируса (известен или изследван) + серум (диагностичен или изследван), поддържа известно време, инфектиране на клетъчната култура, пилешки ембрионални или лабораторно животно. Когато (+} на реакцията, т.е. индикаторни неутрализация на вируса антитела обекти обикновено продължават да съществуват и в контрола - загуба или характерни промени.

14.Metody индикация и идентификация virusov.Reaktsiya вирус хемаглутинацията (RHA) и инхибиране инхибиране хемаглутинацията, същността на практическо приложение.





; Дата: 31.08.2015; ; Прегледи: 591; Нарушаването на авторските права? ;


Ние ценим Вашето мнение! Беше ли полезна публикуван материал? Да | не



ТЪРСЕНЕ:





zdes-stroika.ru - Studopediya (2013 - 2017) на година. Тя не е автор на материали, и дава на студентите с безплатно образование и използва! Най-новото допълнение , Al IP: 66.102.9.26
Page генерирана за: 0.073 сек.