Studopediya

КАТЕГОРИЯ:


Астрономия- (809) Биология- (7483) Биотехнологии- (1457) Военное дело- (14632) Высокие технологии- (1363) География- (913) Геология- (1438) Государство- (451) Демография- (1065) Дом- (47672) Журналистика и СМИ- (912) Изобретательство- (14524) Иностранные языки- (4268) Информатика- (17799) Искусство- (1338) История- (13644) Компьютеры- (11121) Косметика- (55) Кулинария- (373) Культура- (8427) Лингвистика- (374) Литература- (1642) Маркетинг- (23702) Математика- (16968) Машиностроение- (1700) Медицина- (12668) Менеджмент- (24684) Механика- (15423) Науковедение- (506) Образование- (11852) Охрана труда- (3308) Педагогика- (5571) Полиграфия- (1312) Политика- (7869) Право- (5454) Приборостроение- (1369) Программирование- (2801) Производство- (97182) Промышленность- (8706) Психология- (18388) Религия- (3217) Связь- (10668) Сельское хозяйство- (299) Социология- (6455) Спорт- (42831) Строительство- (4793) Торговля- (5050) Транспорт- (2929) Туризм- (1568) Физика- (3942) Философия- (17015) Финансы- (26596) Химия- (22929) Экология- (12095) Экономика- (9961) Электроника- (8441) Электротехника- (4623) Энергетика- (12629) Юриспруденция- (1492) Ядерная техника- (1748) Arhitektura- (3434) Astronomiya- (809) Biologiya- (7483) Biotehnologii- (1457) Военни бизнесмен (14632) Висока technologies- (1363) Geografiya- (913) Geologiya- (1438) на държавата (451) Demografiya- ( 1065) Къща- (47672) журналистика и смирен (912) Izobretatelstvo- (14524) външен >(4268) Informatika- (17799) Iskusstvo- (1338) историята е (13644) Компютри- (11,121) Kosmetika- (55) Kulinariya- (373) културата е (8427) Lingvistika- (374) Literatura- (1642) маркетинг-(23702) математиците на (16968) Механична инженерно (1700) медицина-(12668) Management- (24684) Mehanika- (15423) Naukovedenie- (506) образователна (11852) truda- сигурност (3308) Pedagogika- (5571) Poligrafiya- (1312) Politika- (7869) Лево- (5454) Priborostroenie- (1369) Programmirovanie- (2801) производствено (97 182 ) индустрия- (8706) Psihologiya- (18388) Religiya- (3217) Svyaz (10668) Agriculture- (299) Sotsiologiya- (6455) на (42831) спортист строително (4793) Torgovlya- (5050) транспорт ( 2929) Turizm- (1568) физик (3942) Filosofiya- (17015) Finansy- (26596) химия (22929) Ekologiya- (12095) Ekonomika- (9961) Electronics- (8441) Elektrotehnika- (4623) Мощност инженерно ( 12629) Yurisprudentsiya- (1492) ядрена technics- (1748)

Методи за определяне на изоелектричната точка на протеини

Изоелектричната точка към един от най-важните характеристики на протеина. Всички съществуващи методи за определянето му, основани на измерване на свързаните свойства протеини или макромолекулна структура, или с таксата при различни стойности на рН. Във всички случаи, тя се подготвя поредица от буферни разтвори с различни стойности на рН, които са поставени в тестовите равни количества на протеин в разтвор или в суха форма.

Електрофореза метод. Тъй като самият израз "изоелектрично държавата" предполага равен брой положителни и отрицателни заряди в amfiionah, IEP може да се определи чрез електрофореза върху хартия, която се провежда вярно. Устройството за хартия електрофореза добавя или повече ленти от филтърна хартия и специална хроматографска всеки овлажнен с буферен разтвор с определена рН. В молив маркирани предварително в средата на капват тест ленти прилагат протеинов разтвор. След това, устройството е включено и чрез хартиени ленти с разтвора преминава постоянен електрически ток.

В зависимост от рН на буферния разтвор променя макромолекула заплащане. В среда с рН> IEP са отрицателно заредени:

NH 3 + NH 2 R + OH - «R COO - COO -,

и в среда с рН <IEP - положително:

NH 3 + NH3 + R + H + «R COO - COOH.

В разтвор с рН равно на ПИ; макромолекули придобиват на протеин се зарежда неутрален. По този начин, в електрическото поле ще macroions движат в различни посоки, и неутралните амфотерен йони остават в сила, съгласно схема:

рН <IEP рН IEP рН> IEP
преместване на катода не компенсира преместване на анода

След известно време, токът е изключен, суши хартиени ленти и да се покаже на протеинови петна от тях напръскване с разтвор на нинхидрин. РН на буфера лента, която протеин петно ​​остава на същото място, където спад съответства на изоелектричната точка на протеина се прилага.

електрофореза може да се използва за фино фракциониране на протеините. Например, възможно е да се разделят на а-, В- и G-глобулини в кръвната плазма. тъй като всяка от тях има р! стойност, степента на заряд в същия буферен разтвор ще бъде различен. Ето защо, всеки един от тези фракции на протеини ще имат скоростта му на движение в електрическо поле, че след известно време, ще доведе до раздялата им. Места за всяка фракция показва, например, чрез луминисценцията, ивици се изрязват от хартия, промива се с подходящ разтворител, ако е необходимо и се суши.



В изоелектрично състоянието на макромолекули, дължащи се на минимална такса обикновено се разточва на топки и по-малко хидратирана. Това е основата на други методи, най-надежден и лесен метод се извършва чрез определяне на минималната PI вискозитет. В този случай, измерен с вискозиметър относителен вискозитет серия буфери с добавяне на същото количество протеин. Поради svёrnutosti протеинови макромолекули, присъстващи в изоелектрично състояние в най-плътните глобули ще имат по-нисък вискозитет на разтвора на рН = PI.

Методът, свързани с действието на дехидратиращи агенти. Макромолекули протеини в изоелектричната състояние всичко по-малко хидратирани. Следователно, изборът на протеини от разтвор от действието на дехидратиращи агенти (като алкохол, ацетон, самостоятелно или в присъствието на неутрални соли) протича по-бързо и напълно при всички рН, съответстваща на изоелектричната точка.

По принцип izotochka може да бъде определено по друг начин - .. За скорост желиране, степента на подуване на протеин на прах и т.н. Въпреки това, тези методи не са много точни и изискват много повече протеини за изследване, което не е винаги на разположение.

<== Предишна лекция | На следващата лекция ==>
| Методи за определяне на изоелектричната точка на протеини

; Дата: 04.01.2014; ; Прегледи: 1795; Нарушаването на авторските права? ;


Ние ценим Вашето мнение! Беше ли полезна публикуван материал? Да | не



ТЪРСЕНЕ:


Вижте също:



zdes-stroika.ru - Studopediya (2013 - 2017) на година. Тя не е автор на материали, и дава на студентите с безплатно образование и използва! Най-новото допълнение , Al IP: 66.102.9.22
Page генерирана за: 0.046 сек.